洁净区环境监测是如何操作的？

 

 

洁净区洁净等级划分为：

A级：指高风险操作区，如：灌装、放置胶塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的区域及无菌装配或连接操作的区域。通常用层流操作台（罩）来维持该区的环境状态。

 

B级：指无菌配制和灌装等高风险操作A级区所处的背景区域。

 

C级和D级：指生产无菌药品过程中重要程度较次的洁净操作区。

 

此外还有一些诸如CNC， 百级、千级、之类的概念，这里不做展开讨论。

 

 

 

目录

 

一温湿度

二静压差

三噪音

四照度

五沉降菌

六浮游菌

 

一、温湿度

标准规定：洁净区的温度和相对湿度与药品生产工艺要求相适应。无特殊要求时，洁净区温度为18℃～26℃，相对湿度控制在45%～65%。有特殊要求车间根据工艺控制。

温度观察：检查温湿度计是否完整，视线正对温湿度计水平读取显示的数据，需要记录的应立即填入表格中。

湿度观察：视线正对湿度表，准确读数。需记录的应立即填入表格中。

需要加水的湿度计，在观察前应检查在蓄水腔内是否有水，无水则需加入适量水，再观察湿度。

洁净区的温湿度每天至少记录两次，上午一次，下午一次。

设备计量人员每年至少组织校验一次监控系统的仪器设备。

二、静压差

标准规定：洁净区与非洁净区之间、不同等级洁净区之间的压差应不低于10帕斯卡，相同洁净度等级不同功能的操作间之间应保持2-3帕的压差梯度，以防止污染和交叉污染。

产尘房间与相邻房间呈相对负压。

洁净区的静压差以微压差计显示，每日至少记录两次，上午一次，下午一次。（包括洁净区与室外，不同洁净级别间及所有有压测试时所有的空调系统和层流系统应处于连续的正常运行状态。

洁净室所有的门应关闭，测试时不允许有人穿越房间。

当发现监测结果超出标准规定的范围时，应立即检查原因，必要时对空调系统进行调整。

三、噪音

标准规定：洁净区噪音不得高于70分贝。

洁净区的噪音检查每年不得少于一次，在经过设备大修、厂房改造、工艺布局调整等变的时候应在变结束后重新检测噪音。

检测方法:检测点布置，当面积≤50m2时，仅测房间中心一个点；当房间面积较大时，每增加50m2增加一个点，测点距在1.2m。

四、照度

标准规定：洁净区主要操作间照度不得少于300勒克斯，一般照明的照度均匀度不应小于0.7。

洁净区的照度检查每年不得少于一次，在经过设备大修、厂房改造、工艺布局调整等变的时候应在变结束后重新检测照度。

检测要求：室内照度测度必须在室温已趋稳定，光源光输出趋于稳定后进行（对荧光灯必须有100h）。

检测方法:测点平面离地面0.85m，按间距1-2m布点，测点距墙面1m。其要求基本与洁净度的测定位置要求相同。记录实测照度值并计算总的平均照度。

照度测量一般仅测定除局部照明之外的一般照明。

五、沉降菌

5.1 方法概述

本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。

5.2 使用的仪器和设备

高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。

恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。

 

培养皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。

培养基：普通营养琼脂培养基。将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30～35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2～8℃的环境中存放。

5.3 测试步骤

采样：将已制备好的培养皿放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖上盖后倒置。

培养:在30～35℃培养，时间为5天。每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。

菌落计数：用肉眼直接计数，然后用5～10倍放大镜检查，是否有遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。

5.4 测试状态

沉降菌测试前，被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求，静压差必须控制在规定值内。

沉降菌测试前，被测试洁净区已经过消毒。

测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。

5.5 测试人员

测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。

5.6 测试时间

对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。

5.7 沉降菌采样点

采样点数目及其布置：少采样点数目：沉降菌的少采样点数可按表1确定。在满足少测点数的同时，不宜满足少培养皿数，见表2。

表1少采样点数目

 

 

表2少培养皿数

 

 

5.8 采样点的布置

 

工作区测试点位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。

5.9 结果计算

用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

平均菌落数的计算见下式：

 

式中：m为平均菌落数；

 

m1为1号培养皿菌落数；

 

m2为2号培养皿菌落数；

 

mn为n号培养皿菌落数；

 

n为培养皿总数。

 

结果评定：用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。

 

洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标准。见表3。

 

若某洁净区的菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。

 

重新测试仍不合格，按“洁净室环境监控管理规程”进行超标调查。

 

5.10 注意事项

 

测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。

 

采取一切措施防止人为对样本的污染。

 

对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。

 

由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。

 

采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

 

六、浮游菌

6.1 取样前准备工作

 

依据检测区域的取样点数，按照《培养基配制、灭菌标准操作程序》制备适量的营养琼脂培养基。

 

在超净工作台内，以无菌操作法将配制好的营养琼脂培养基以每皿约15ml的装量分装，待培养基凝固后移出洁净区。

 

将制备的营养琼脂平皿倒置于隔水式恒温水浴培养箱内于30～35℃培养48小时。取出逐个检查，确认无菌落数后即可使用。

 

6.2 采样

 

将上述制备好的营养琼脂平皿交与QA人员取样。

 

6.3 仪器、设备和培养基

 

浮游菌采样器、培养皿（φ90mm×15mm）、培养基（营养琼脂培养基）、恒温培养箱

 

6.4 仪器、设备、培养基的要求

 

浮游菌采样器必须要有流量计和定时器。应严格按仪器说明书的要求进行操作。采样器必须按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性，检验项目有：定时器，转盘转速，流量计。每次测试前应先接通电源，启动真空抽气泵，然后调节流量计和定时器。空气采样量根据需要选定，已知采样器的流量（L/min）,设定采样时间（min）两者相乘即得采样量（L）。采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造，采样管严禁渗漏，内壁应光滑，采样管的长度应根据测定点的高度定，尽量减少弯曲。

 

6.5 测试方法

 

测试用仪器、培养皿表面必须严格消毒。采样器进入被测房间前先用消毒剂灭菌。用消毒剂擦净培养皿的外表面。采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盘、转盘以及罩子的内外面，采样结束再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。采样口及采样管使用前必须高温灭菌，如用消毒剂对采样管的外壁、内壁进行消毒，应将管中的残留液倒掉并晾干。采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。

6.6 采样程序

 

仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并调好流量、转盘转速。关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样品缝隙高度。置采样器于采样点后，开启采样器、转动定时器，根据采样量设定采样时间。

6.7 测试状态

浮游菌测试前微生物限度检查室已经消毒过。测试状态为静态测试，并在报告中注明测试状态。

6.8 测试人员

测试人员必须穿戴符和被测环境级别的工作服。静态测试时，室内人员不得多于2人。

6.9 测试时间

对单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。

少采样点数目及其布置，小采样量，见下表:

 

工作区测点位置离地0.8m～1.5m左右，送风口测点位置离开送风面30cm左右；可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。每个采样点一般采样一次。对于单向流或送风口，采样器采样管口朝向应正对气流方向；对于非单向流，采样管口向上。布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口1m以上。采样时，测试人员应站在采样口的下风侧。

6.10 培养

 

取样结束后将平皿复倒置隔水式恒温水浴培养箱内于30～35℃培养48小时。并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。

菌落计数：用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，是否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时，仍以2个或2个以上的菌落计数。培养结束，将上述培养后的平皿取出，逐个点计菌落数，必要时用放大镜检查，并记录。

6.11 结果计算

平均菌落数的计算见下式：

平均菌落数m=

 

式中：

 

m为该房间（或区域）的平均菌落数；

 

m1、m2‥‥‥mn为该房间（或区域）各取样点的菌落数；

 

N为培养皿总数

 

记录：测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差、测试状态及测试数